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臺(tái)式高速離心機(jī)密度梯度離心法介紹

更新時(shí)間:2017-06-28      點(diǎn)擊次數(shù):5926

  在實(shí)際使用中,根據(jù)樣品的不同需要使用臺(tái)式高速離心機(jī)采用不同的分離方法進(jìn)行分離。分離方法一般有三種,今天介紹密度梯度離心法。

  密度梯度離心也稱為平衡密度梯度離心。密度梯度離心是根據(jù)樣品中各組分的浮力密度差不同進(jìn)行分離。在離心場中,溶液中顆粒浮力密度小則上浮,浮力密度 大則下沉,上浮和下沉的顆粒會(huì)一直延梯度液移動(dòng)到與其浮力密度恰好相等的位置上,該位置也稱顆粒的等密度點(diǎn),離心時(shí)樣品各組分顆粒將按其密度大小分別移等密度點(diǎn)形成區(qū)帶,形成的區(qū)帶不會(huì)因離心時(shí)間長而發(fā)生變化。離心后收集所需區(qū)帶顆粒即為純化組分。離心前后樣品的狀態(tài)如下圖所示。

 

  因此,在離心前,樣品可置于梯度液的任意位置,一般是均勻分布在梯度液中。等密度區(qū)帶離心法的離心效果取決于樣品顆粒的浮力
密度差,密度差越大,分離效果越顯著,與樣品顆粒的大小與現(xiàn)狀無關(guān)。
等密度梯度離心經(jīng)常使用的梯度液包括氯化銫(CsCI)、溴化鈉等,典型的應(yīng)用包括質(zhì)粒DNA(或者其他DNA、RNA片段)的大規(guī)模高純度純化,脂蛋白的分離純化等。
質(zhì)粒DNA的氯化銫等密度梯度離心分離純化流程如下: 
 

  

脂蛋白溴化鈉等密度梯度離心分離純化流程如下:

1)人全血1000 g離心10分鐘去除各種血細(xì)胞,上清為血清。

2)血清加入NaBr密度梯度液(不連續(xù)梯度)的底部,往上依次鋪濃度變小的梯度液。

3)然后在水平轉(zhuǎn)頭中,260,000 g離心力14℃下離心24小時(shí),各種密度的脂蛋白從管底浮向它們自己的等密度區(qū)形成了純的各種密度脂蛋白區(qū)。而離心管底部保留著各種血清蛋白。
4)用上排法從離心管中抽出格層液體,經(jīng)DU蛋白分析儀測定,定位各種不同密度血清脂蛋白。 

  以上是蜀科臺(tái)式高速離心機(jī)密度梯度離心法的介紹,需要相關(guān)離心機(jī)的朋友更多詳情可以咨詢蜀科儀器。

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